【用途】 本试剂盒用于检测山羊和绵羊血清样品中的小反刍 兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants Virus,PPRV)抗 体。
【原理】 本试剂盒采用阻断ELISA方法原理进行检测。在微孔酶 标板上包被PPRV抗原,与待检血清反应,加入辣根过 氧化物酶标记的单抗反应后,再加入TMB底物液作用 显色,在酶标仪450nm波长测定各孔吸光度值,计算各 样品的阻断率,判定结果。如果待检血清样品中含有抗 体,与包被抗原结合,从而阻断了酶标记的抗PPRV单 抗与包被板中抗原的反应,显色浅;如果待测血清样品 中不含抗体,则不能阻断酶标单抗与包被板中抗原的反 应,显色深。
【试剂盒组成】详见说明书
【其它需自备的物品】
1. 50μl 和 100μl 的精确微量移液器,200μl八或十二通 道微量移液器;
2. 一次性移液器吸头;
3. 37℃孵育箱;
4. 1000mL 量筒(配制洗涤液用);
5. 酶标仪(含450nm波长滤光片);
6. 蒸馏水或去离子水;
7. 自动或手动洗板系统;
8. 微量振荡器;
9. 吸水纸。
【注意事项】 详见说明书
【样品制备】 取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清 亮、无溶血。
【洗涤液配制】 使用前,浓缩洗涤液应恢复至室温(25℃左右), 并摇动使析出的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作 20 倍稀释(例如:用30 ml浓缩液加上570ml水)。
【操作步骤】 使用前所有试剂应恢复至室温(25℃左右),试剂应轻 轻旋转或振荡混匀。
1. 取出反应板,在记录表上记录阳性对照、阴性对照和 样品的位置;
2. 在相应孔中分别加入阳性对照(2孔)、阴性对照 (2孔)原液,100μl/孔。待检样品孔中先加入50μl 样品稀释液,再加入50μl待检样品。充分混匀后, 贴上封板膜,置37℃孵育60分钟;
3. 小心揭掉封板膜,弃去各孔中液体、拍净。每孔加 350μl 洗涤液,静置约30秒,重复洗涤5次,最后 在吸水纸上拍净;
4. 每孔加入酶结合物液100μl,贴上封板膜,置37℃左 右孵育30分钟;
5. 重复步骤3;
6. 每孔加入底物液A和底物液B各50μl,轻轻振荡混 匀,置37℃左右避光显色10分钟;
7. 每孔加入终止液50μl,轻轻振荡混匀,置酶标仪 450nm 波长处测定各孔OD值。
【计算方法】详见说明书
【结果判定】详见说明书
【贮藏条件】2-8℃避光保存。
【保存期】该产品有效期12个月。