用途 ：本试剂盒采用实时荧光RT-PCR方法检测偶蹄动物水泡皮、水泡液及OP液中的口蹄疫病毒 （FMDV）的RNA。适用于FMDV的诊断、检测和流行病学调查。 原理 利用离心柱内硅基质膜提取样品总RNA，在高效反转录酶的作用下，以RNA为模板，以 引物为起点合成与RNA模板互补的cDNA链。在热启动Taq 酶的作用下，经高温变性、中温退火 及延伸的循环，使特异DNA片段的拷贝数放大一倍，经荧光素标记的探针与扩增的DNA杂交，利 用Taq 聚合酶的5'→3'外切活性，使荧光探针的报告基团与淬灭基团分离，发出特异性荧光信号，利 用荧光PCR仪检测特异性荧光信号，根据样品Ct值的大小及扩增曲线的形成情况判定结果。

试剂盒组成 ：详见说明书

保存期 ：本产品有效期为12个月。

需要自备的物品

1．仪器：分析天平、离心机、荧光PCR扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器（2 µL、20 µL、200 µL、1000 µL）。

2．耗材：荧光PCR专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL经焦碳酸二乙酯（DEPC）水 处理的灭菌离心管、吸头（10 µL、200 µL、1000 µL）、灭菌双蒸水。

注意事项

1．所有接触病料的物品均应合理处置，以免污染实验室。

2．PCR 整个试验分配液区、模板提取区、扩增区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区。严 禁器材和试剂倒流。

3．所有试剂应在规定的温度储存。-20℃保存的各试剂管使用前应完全融化，8000 rpm离心15 s， 使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时移液器吸头尽量在液体表面层吸取，使用后立 即放回-20 ℃。

4．在RNA提取过程中，避免RNA酶污染，尽量缩短操作时间。

5．注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。

6．严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时等全部过程必须精确。

7．反应体系应在特定配液区或者超净工作台中配制，整个实验过程严格控制污染。

8．反复冻融试剂将减低检测灵敏度，本试剂盒应在3次内用完，请严格按试剂盒说明书操作。

样品制备

1 样品采集：病死或扑杀动物，取水泡皮及水泡液；待检活动物，取OP液2～3 mL。2～8 ℃保存， 送实验室检测。（要求送检病料新鲜，严禁反复冻融病料。）

2 样品处理：每份样品分别处理。

2.1 组织样品处理：称取水泡皮0.05 g于研磨器中研磨，加入生理盐水继续研磨，待匀浆后转至1.5 mL灭菌离心管中，8000 rpm离心2 min，取上清液100 µL于1.5 mL灭菌离心管中。

2.2 液体样品处理：取OP液或水泡液样品100 µL，置1.5 mL灭菌离心管中。

2.3 阳性对照处理：取阳性对照100 µL，置1.5 mL灭菌离心管中。 2.4 阴性对照处理：取阴性对照100 µL，置1.5 mL灭菌离心管中。

操作步骤 详见说明书