【用途】 本试剂盒采用实时荧光PCR方法检测猪全血、 血清、淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体、肺、肌肉等 样品及环境样品中非洲猪瘟病毒(ASFV)的DNA, 适用于ASFV的检测、诊断和流行病学调查。
【原理】 提取样品DNA作为模板,以引物为起点合成与 DNA模板互补的新链,在热启动Taq酶的作用下, 经高温变性、中温退火及延伸的循环,使特异DNA 片段的拷贝数放大一倍,经荧光素标记的探针与扩 增的DNA杂交,利用Taq聚合酶的5'→3'外切活性, 使荧光探针的报告基团与淬灭基团分离,发出特异 性荧光信号,利用荧光PCR仪检测特异性荧光信号, 根据样品Ct值的大小及扩增曲线的形成情况判定结 果。
【试剂盒组成】 详见说明书
【需要自备的器材】
1.试剂:核酸提取试剂。
2.仪器:离心机、荧光PCR扩增仪、-20℃冰箱、 可调移液器(2µL、20µL、200µL、1000µL)。
3.耗材:荧光PCR专用反应管、吸头(10µL、200µL、 1000µL)。
【使用注意事项】
1. 建议与世纪元亨提供的柱式DNA核酸提取试剂 盒配套使用。
2. 实验过程中进行阴性对照和阳性对照样品的质 量控制,需进行提取,建议提取用量分别为 100µL。
3. 所有接触病料的物品均应合理处置,以免污染实 验室。
4. PCR整个试验分配液区、模板提取区、扩增区。 流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区。严禁 器材和试剂倒流。
5. 所有试剂应在规定的温度储存。-20℃保存的各 试剂管使用前应完全融化,8000rpm 离心 15s, 使液体全部沉于管底,放于冰盒中,吸取液体时 移液器吸头尽量在液体表面层吸取,使用后立即 放回-20℃。
6. 注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂,试剂盒之间的成分不要混用。
7. 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过 程中移液、定时等全部过程必须精确。
8. 反应体系应在特定配液区或者超净工作台中配 制,整个实验过程严格控制污染。 9. 反复冻融试剂将降低检测灵敏度,本试剂盒应在 3 次内用完。
【样品采集】 病死或扑杀猪,取脾脏、淋巴结、肾脏、扁桃 体、肺、肌肉等;待检活猪,用注射器取血5 mL; 或采集与病猪相关场所的粪便、饲料、污水等环境 样品。2~8 ℃保存,送实验室检测。(要求送检病料 新鲜,严禁反复冻融。)
【实时荧光PCR操作】 详见说明书
【结果判定】详见说明书
【规格】50份/盒
【保存及有效期】于-20℃以下保存,有效期为 12 个月。