【用途】 本试剂盒采用实时荧光PCR方法检测猪全血、 血清、淋巴结、脾脏、肾脏、扁桃体、肺、肌肉等 样品及环境样品中非洲猪瘟病毒（ASFV）的DNA， 适用于ASFV的检测、诊断和流行病学调查。

【原理】 提取样品DNA作为模板，以引物为起点合成与 DNA模板互补的新链，在热启动Taq酶的作用下， 经高温变性、中温退火及延伸的循环，使特异DNA 片段的拷贝数放大一倍，经荧光素标记的探针与扩 增的DNA杂交，利用Taq聚合酶的5'→3'外切活性， 使荧光探针的报告基团与淬灭基团分离，发出特异 性荧光信号，利用荧光PCR仪检测特异性荧光信号， 根据样品Ct值的大小及扩增曲线的形成情况判定结 果。

【试剂盒组成】 详见说明书

【需要自备的器材】

1．试剂：核酸提取试剂。

2．仪器：离心机、荧光PCR扩增仪、-20℃冰箱、 可调移液器（2µL、20µL、200µL、1000µL）。

3．耗材：荧光PCR专用反应管、吸头（10µL、200µL、 1000µL）。

【使用注意事项】

1． 建议与世纪元亨提供的柱式DNA核酸提取试剂 盒配套使用。

2． 实验过程中进行阴性对照和阳性对照样品的质 量控制，需进行提取，建议提取用量分别为 100µL。

3． 所有接触病料的物品均应合理处置，以免污染实 验室。

4． PCR整个试验分配液区、模板提取区、扩增区。 流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区。严禁 器材和试剂倒流。

5． 所有试剂应在规定的温度储存。-20℃保存的各 试剂管使用前应完全融化，8000rpm 离心 15s， 使液体全部沉于管底，放于冰盒中，吸取液体时 移液器吸头尽量在液体表面层吸取，使用后立即 放回-20℃。

6． 注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂，试剂盒之间的成分不要混用。

7． 严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过 程中移液、定时等全部过程必须精确。

8． 反应体系应在特定配液区或者超净工作台中配 制，整个实验过程严格控制污染。 9． 反复冻融试剂将降低检测灵敏度，本试剂盒应在 3 次内用完。

【样品采集】 病死或扑杀猪，取脾脏、淋巴结、肾脏、扁桃 体、肺、肌肉等；待检活猪，用注射器取血5 mL； 或采集与病猪相关场所的粪便、饲料、污水等环境 样品。2～8 ℃保存，送实验室检测。（要求送检病料 新鲜，严禁反复冻融。）

【实时荧光PCR操作】 详见说明书

【结果判定】详见说明书

【规格】50份/盒

【保存及有效期】于-20℃以下保存，有效期为 12 个月。